La trypsinisation est le processus de dissociation cellulaire utilisant la trypsine, une enzyme protéolytique qui décompose les protéines, pour dissocier les cellules adhérentes du vaisseau dans lequel elles sont cultivées. Lorsqu'elle est ajoutée à une culture cellulaire, la trypsine décompose les protéines qui permettent aux cellules d'adhérer au vaisseau.
Pourquoi essayons-nous de trypsiniser les cellules ?
La trypsinisation est souvent pratiquée pour permettre le passage des cellules dans un nouveau récipient, l'observation à des fins d'expérimentation ou la réduction du degré de confluence dans le flacon en supprimant un pourcentage de les cellules.
Comment fonctionne la trypsine pour détacher les cellules ?
Trypsine/EDTA est une méthode combinée pour détacher les cellules. La trypsine coupe les protéines d'adhésion dans les interactions cellule-cellule et cellule-matrice en coupant l'acide aminé des protéines d'adhésion spécifiquement au niveau de la lysine ou de l'aginine sur le C-terminal si l'acide aminé en amont n'est pas de la proline.
Comment obtient-on des cellules adhérentes trypsinisées ?
Procédure
- Retirer le milieu du récipient de culture par aspiration et laver la monocouche avec une solution saline exempte de Ca2+ et Mg 2+ pour éliminer toute trace de sérum. …
- Distribuer suffisamment de solution de trypsine ou de trypsine/EDTA dans le(s) récipient(s) de culture pour recouvrir complètement la monocouche de cellules et placer dans un incubateur à 37 °C pendant environ 2 minutes.
Comment désactiver la trypsine en culture cellulaire ?
Une fois que les cellules apparaissent détachées, ajoutez 2 volumesde milieu de croissance complet préchauffé pour inactiver trypsine. Dispersez délicatement le milieu en passant plusieurs fois sur la surface de la couche cellulaire pour assurer la récupération de >95% des cellules. Pour les cultures sans sérum, inhibiteur de trypsine de soja (produit n°
