Vous pouvez également dessaler votre échantillon par ultrafiltration à 1 dixième du volume précédent, diluer à nouveau et répéter l'étape UF. La meilleure méthode de dessalage est le dessalage par filtration sur gel contre un tampon 50 mM, plutôt que l'ultrafiltration (classique, non centrifuge).
Qu'est-ce que le dessalage dans la purification des protéines ?
Le dessalage est utilisé pour éliminer les sels des solutions de protéines, le phénol ou les nucléotides non incorporés des acides nucléiques ou l'excès de réactifs de réticulation ou de marquage des protéines conjuguées.
Comment purifier les protéines ?
Dans la purification de protéines en vrac, une première étape courante pour isoler les protéines est la précipitation avec du sulfate d'ammonium (NH4) 2SO4. Ceci est réalisé en ajoutant des quantités croissantes de sulfate d'ammonium et en recueillant les différentes fractions de protéines précipitées. Par la suite, le sulfate d'ammonium peut être éliminé par dialyse.
Comment tamponnez-vous les protéines d'échange ?
L'échange de tampon, cependant, est effectué par premier équilibrage avec la résine de la colonne avec le tampon dans lequel l'échantillon doit se retrouver. Dans les deux cas, les constituants du tampon transportant l'échantillon dans la colonne sera remplacée par la solution avec laquelle la colonne est pré-équilibrée.
Laquelle des techniques de chromatographie suivantes peut être appliquée pour le dessalage des protéines ?
Comme mentionné ci-dessus, la filtration sur gel peut être utilisée efficacement pour les protéinesdessalement et est accompli en équilibrant d'abord la colonne de filtration sur gel avec de l'eau. Cependant, l'échange de tampon est accompli en équilibrant d'abord la résine de la colonne avec le tampon cible.
