Les données de densitométrie générées pour les transferts Western sont couramment utilisées pour comparer l'abondance des protéines entre les échantillons. … Des données de densitométrie non linéaires ont été observées lorsque des Western blots ont été détectés à l'aide de la fluorescence infrarouge ou de la chimiluminescence, et dans différentes conditions de SDS-PAGE.
Qu'est-ce que l'analyse densitométrie ?
La densitométrie est la mesure quantitative de la densité optique dans les matériaux sensibles à la lumière, tels que le papier photographique ou le film photographique, en raison de l'exposition à la lumière.
Comment utilisez-vous la densitométrie dans l'image J ?
Densitométrie avec ImageJ
- Cliquez au centre du carré et faites-le glisser jusqu'à la voie suivante. …
- Pour la dernière voie, répétez la procédure mais appuyez sur Ctrl et 3 pour définir la dernière voie. …
- Utilisez l'outil Ligne pour tracer les lignes afin d'éliminer l'arrière-plan de la voie des calculs. …
- Aller à: Analyse→Gels→Label Peaks pour obtenir le rapport.
Comment analysez-vous les résultats du western blot ?
Validez vos outils de quantification . Par exemple, exécutez une tache où les voies sont chargées avec 20 µg, 15 µg et 10 µg de protéines totales. Après analyse, la quantification relative des bandes cibles doit être de 2, 1,5 et 1. Essayez différents outils et paramètres de quantification jusqu'à ce que vous puissiez reproduire de manière fiable les résultats corrects.
Comment quantifier un western blot ?
Étape 1: Déterminer le bruit de fond soustraitdensités de votre protéine d'intérêt (PI) et le contrôle de normalisation (NC). Étape 2: Identifiez le NC qui a la valeur de densité la plus élevée. Étape 3: Divisez toutes les valeurs NC par la valeur de densité NC la plus élevée pour obtenir une valeur NC relative.
