Les artefacts de dimère d'amorce se produisent généralement à un grand nombre de cycles de seuil (généralement > 35 cycles), qui est supérieur au nombre de cycles de seuil pour l'amplicon souhaité. Les dimères d'amorces augmentent considérablement lorsque de l'ADN génomique hétérologue est ajouté.
Où verriez-vous des dimères d'amorces sur un gel d'ADN ?
Dans la PCR non quantitative, le dimère d'amorce apparaîtra sous la forme d'un frottis plus ou moins pâle sur un gel d'agarose, en dessous de la bande de produit d'intérêt.
Comment se forment les dimères d'amorces ?
Les dimères d'amorces forment lorsque deux amorces se lient l'une à l'autre, au lieu de l'ADN matrice, en raison des régions de complémentarité des amorces.
Comment détecter les dimères d'amorce ?
Le moyen le plus simple de vérifier la présence de dimères d'amorces est de comparer vos réactions à votre contrôle négatif (eau au lieu d'ADN ou d'ARN). Les dimères d'amorces se formeront toujours dans le contrôle négatif. Certains ensembles d'amorces sont plus susceptibles de former des dimères que d'autres.
Pourquoi les dimères d'amorces apparaissent-ils ?
La plupart des dimères d'amorces sont observés en raison de la forte concentration de l'amorce dans le mélange de réaction PCR. Ou s'il n'y a pas d'amplification PCR et que vous pouvez voir le dimère d'amorce dans le gel d'agarose. Si vous êtes en mesure de voir le produit PCR, vous pouvez réduire la concentration de l'amorce et conserver les mêmes conditions.
