Une fois que les cellules apparaissent détachées, ajoutez 2 volumes de milieu de croissance complet préchauffé pour inactiver la trypsine. Dispersez délicatement le milieu en le tapotant plusieurs fois sur la surface de la couche cellulaire pour assurer la récupération de >95 % des cellules.
Comment arrêter l'activité de la trypsine ?
La digestion par la trypsine peut être arrêtée par congélation ou en abaissant le pH de la réaction en dessous de pH 4 en ajoutant de l'acide formique, acétique ou trifluoroacétique (la trypsine retrouvera son activité lorsque la le pH est élevé au-dessus de pH 4). Les échantillons digérés peuvent être conservés à -20 °C.
Qu'est-ce qui neutralise la trypsine ?
Un tampon contenant des ions calcium et magnésium ralentira également l'activité de la trypsine. Le FBS est cependant le moyen le plus efficace d'inhiber l'activité de la trypsine.
Le sérum inactive-t-il la trypsine ?
Le sérum inactive la trypsine résiduelle restante de la digestion enzymatique des reins et les enzymes protéolytiques ensuite synthétisées par les cellules. Les cellules fraîchement trypsinisées pourraient être cultivées en monocouches en l'absence de sérum à condition qu'elles soient lavées à plusieurs reprises pour éliminer la trypsine résiduelle.
Combien de médias faut-il pour désactiver la trypsine ?
Tant que vous utilisez au moins un rapport 1:1 de milieu contenant 5 à 10 % de sérum avec votre trypsine, il devrait y avoir une inhibition plus que suffisante, suivie d'une centrifugation et échange moyen avec un milieu frais.
