Cependant, lorsque les spectres d'émission se chevauchent, la fluorescence de plus d'un fluorochrome peut être détectée. Pour corriger ce chevauchement spectral, un processus de compensation de fluorescence est utilisé. Cela garantit que la fluorescence détectée dans un détecteur particulier dérive du fluorochrome qui est mesuré.
Pourquoi avons-nous besoin d'une compensation en cytométrie en flux ?
Une compensation est nécessaire pour une expérience de cytométrie en flux à cause de la physique de la fluorescence. Un fluorochrome est excité et émet un photon dans une gamme de longueurs d'onde. Certains de ces photons se répandent dans un deuxième détecteur, ce qui fait apparaître des échantillons colorés uniques doublement positifs.
Quel est le but principal de l'utilisation d'une cellule de compensation ?
L'objectif principal est de permettre la mesure de la vraie fluorescence dans le canal primaire contaminé par le débordement des fluorophores voisins. Par conséquent, la compensation corrige l'« intrusion » de fluorescence entre les fluorophores. Cependant, il n'est pas parfait et ne peut pas corriger tous les effets indésirables.
Qu'est-ce que la matrice de compensation ?
Une matrice de compensation est calculée à l'aide de fichiers de contrôle fluorescents monochromes qui sont collectés sur ImageStream ou FlowSight avec tous les canaux collectés et en l'absence d'éclairage en fond clair ou SSC.
Qu'est-ce que la compensation spectrale ?
Utilisation spectralecompensation signifie que signal provenant de détecteurs non primaires est toujours utilisé pour améliorer le vrai signal des marqueurs lorsque cela est possible. Les échantillons de contrôle primaires sont utilisés pour la dénomination des paramètres. … Les échantillons utilisés pour les détecteurs primaires aident également à nommer ces paramètres après la compensation spectrale.
